Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展极快的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现胰脏自身免疫反应到再次出现1型号乳癌临床病征的方面率在成年人时期就有很好的描述，多个胰脏自身免疫反应阳性的成年人里有70%在血清类比后10年内入院乳癌，而随访15年的成年人这一%增加到84%。比起，占临床1型号乳癌一半以上的型号1型号乳癌的肺癌前提还很难得到充分的研究成果。

愈来愈多的人开始运用于分期该系统来定义1型号乳癌的方面：个形体在再次出现多种胰脏自身免疫反应时进入第1阶段，再次出现血糖持续性时进入第2阶段，再次出现病征时进入第3阶段。一些多发胰脏自身免疫反应阳性的个形体，在1期和2期，方面较很慢，并发展为肺癌的1型号乳癌。我们之前描述了一第一组在首次监测到多种胰脏自身免疫反应抽取后数10年无乳癌的极很慢方面者，这第一组病征人数少，但不同之处非常明确。随后，我们发现胰脏自身免疫特异性CD8+T支线粒形体重排在方面缓很慢的病征里大形体上不不存在，但在近期肺癌和长年不存在的乳癌病征里很容易监测到。这可能得出论据，与方面病征来得，这些病征自身免疫重排的调节增强。

早期研究成果得出论据，尽管调节性T支线粒形体(Treg)数目正常，但乳癌病征不存在一些系统缺陷，其里包括对IL-2的重排控制能力减小。此外，乳癌病征里的物理现象CD4+T支线粒形体可能对调节更具抵抗性，表现为物理现象T支线粒形体的可抑制弱化，自然地产生的Treg和形活体产生的抑制Treg，以及免疫境遇的CD4+T支线粒形体里IL-2重排弱化。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T支线粒形体(Treg)在一小群极缓很慢方面者里的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访等待时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群为基础的纵向研究成果，在21岁以下确诊的病征亲属里定期检查1型号乳癌的危险性环境因素。我们之前描述了长年缓很慢方面者的不同之处，他们保持多重胰脏自身免疫反应阳性超过10年，但很难再次出现乳癌的临床病征，很慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续保持无乳癌并想共享大量血液抽取的缓很慢方面者划入T和B支线粒形体系统分析。在目前的研究成果里，8名很慢方面者(SP第一组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的胰脏自身免疫反应阳性。所有的参加者都受制于1型号乳癌方面的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身免疫反应对某些免疫的阳性重排，然而，一名病征已经受制于2期数6年，但很难再次出现临床病征，一名病征被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集试验抽取时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里对该遗传物质开展了实际上分析。除去外周血单个氢支线粒形体(PBMCs)，引入多参数流式支线粒形体拳法和T支线粒形体可抑制试验分析遗传物质里Treg的频谱、表观号和系统。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无监督聚类分析，分析Treg表观号。

结果：与健康遗传物质来得，来自很慢方面形体的失忆CD4+T支线粒形体的监督聚类表明，触发的失忆CD4+ Treg频谱增加，与免疫抑制抑制的TNFR关的细胞(GITR)传达增加有关。一名HbA1c增高的病征与方面缓很慢者和给定的对照第一组来得，Treg谱有所各不相同。系统分析得出论据，与健康遗传物质来得，来自缓很慢方面形体的Treg介导的CD4+物理现象T支线粒形体可抑制明显受损。表现为对物理现象CD4+T支线粒形体CD25和CD134传达的可抑制增加。

平面图1 深入的表观号分析表明，CD4+Treg病毒性号在很慢方面队列里增加。由FlowSOM降解的Treg会议室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -支线粒形体上。根据上面物传达鉴定出10个元簇:失忆T支线粒形体_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T支线粒形体;HLA-DR + GITR +失忆T支线粒形体;支线程Treg_1;支线程Treg_2;支线程Treg_3;和支线程Treg_4。(a)运用于9个各不相同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个节点亦然一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点第一组远处上色。每个节点里的面包平面图坚称单个上面的传达级别。(b)每个元聚类的热平面图，以表明整形体上面传达。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)降解平面图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的孔洞。(e-l)来得之下重元素为每个metacluster盒等分(重元素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:支线程Treg_2 (e),支线程Treg_3 (f),支线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T支线粒形体(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T支线粒形体(l)。红色带子亦然**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩监测。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 运用于CITRUS的预测模型号证实，Treg频谱的增加是方面缓很慢的徽标。分级旁路(a - f)和大豆分析(g-k)尤其SP参加者和给定的HD参加者在CD4+CD45RA−T支线粒形体上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的亦然性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达开展除去，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及遗传物质SP 606(红色)里CD25+ cd127的频谱综合平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路偏序的盒等分;(c) HLA-DRloGITR−(支线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(支线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(支线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+支线程T cell)。(g - i)柑橘簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达高强度着色，圆圈醒目的簇被辨认为SP和HD队列错综复杂的各不相同。(j)盒等分表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组里，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的来得之下重元素(%)。(k)直方平面图表明每个簇的表观号(粉红色)和Treg上面来得之下传达与剧里传达(深蓝色);上列，支线程Treg_3;下面一行，支线程Treg_4。剧里与所有其他簇里上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加符号秩监测

平面图3 与健康献血者来得，方面缓很慢者失忆treg的GITR增加。每个失忆CD4+T支线粒形体元簇(失忆T支线粒形体_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T支线粒形体;HLA-DR + GITR +失忆T支线粒形体;支线程Treg_2;支线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR传达串联，表明直方平面图(c)和综合平面图(d)。Wilcoxon相加符号秩和监测，p< 0.07(红色)所有遗传物质包括，p< 0.05(深蓝色)遗传物质SP 606和给定的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR传达，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(红色)串联，表明直方平面图(e)和综合平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加符号秩监测

平面图4 来自缓很慢方面的CD4+ treg支线粒形体控制物理现象CD4+T支线粒形体的控制能力减小。SP第一组用深蓝色的支线和带子坚称，HD第一组用黄色的支线和带子坚称，红色的支线/带子坚称遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒形体开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按观察的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造支线粒形体，培养出来3天后开展流式支线粒形体拳法监测。(a-d)与CD4+这样的话者来得之下应的treg培养出来(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养出来。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE可抑制一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制一般而言。运用于阳性对照(触发的响应支线粒形体都有treg)计算可抑制一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

平面图5 物理现象CD4+T支线粒形体对缓很慢方面的T支线粒形体再造的可抑制更敏感。SP第一组用深蓝色的支线和带子坚称，HD第一组用黄色的支线和带子坚称，红色的支线/带子坚称遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒形体开展分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按观察的%高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造支线粒形体，培养出来3天后开展流式支线粒形体拳法(CD25反染)和支线粒形体因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者协同培养出来。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在培养出来出来里的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

论据：我们得出的论据是，来自缓很慢方面子的再造失忆CD4+Treg在GITR传达里得到了扩展和多样化，突显了进一步研究成果Treg在1型号乳癌风险个形体里的该系统性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28