Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩大

从第一次浮现家兔自身血清到浮现1同型肾病药理学征状的实质性率在婴幼儿后期就有很好的描述，多个家兔自身血清阴性的婴幼儿中所有70%在血清匹配后10年内中风肾病，而随访15年的婴幼儿这一比重减小到84%。相对之下，占药理学1同型肾病一半以上的同型1同型肾病的得病机制还不会得到确实的数据归纳。

日渐多的人开始采用分期系统对来定义1同型肾病的实质性：形态在浮现多种家兔自身血清时踏入第1阶段，浮现摄入量持续性时踏入第2阶段，浮现征状时踏入第3阶段。一些多发家兔自身血清阴性的形态，在1期和2期，实质性较较慢，并演进为得病的1同型肾病。我们以前描述了一分组在首次测定到多种家兔自身血清抽样后将近10年无肾病的总括较慢实质性者，这分组患儿人口数再加，但不同之处非常加明确。随后，我们找到家兔自身抗原特异性CD8+T蛋白质反应在实质性加速的患儿中所基本不共存，但在近期得病和密切相关的肾病患儿中所很容易测定到。这可能确实，与实质性患儿相对，这些患儿自身免疫反应的抑制强化。

早期数据归纳确实，尽管抑制性T蛋白质(Treg)数目正常，但肾病患儿共存一些动态缺陷，其中所有数对IL-2的反应能够降低。此外，肾病患儿中所的不稳定性CD4+T蛋白质可能对抑制颇具抵抗性，表现为不稳定性T蛋白质的诱导移向，自然导致的Treg和体外导致的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质中所IL-2反应移向。本数据归纳的目的是描述了CD4+抑制性T蛋白质(Treg)在海岸边总括加速实质性者中所的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

分析方法：BOX数据归纳是一项以人群结合的斜向数据归纳，在21岁不限确诊的患儿亲属中所检查1同型肾病的危险因素。我们以前描述了长期加速实质性者的不同之处，他们保持多重家兔自身血清阴性超过10年，但不会浮现肾病的药理学征状，较慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名一直保持无肾病并愿意给予大量血液抽样的加速实质性者纳入T和B蛋白质动态归纳。在目前的数据归纳中所，8名较慢实质性者(SP分组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的家兔自身血清阴性。所有的自发性都处于1同型肾病实质性的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身血清对某些抗原的阴性反应，然而，一名患儿早就处于2期将近6年，但不会浮现药理学征状，一名患儿被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验抽样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中所对该ADP顺利完成了单独评核。受控外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多模板流式蛋白质绝技和T蛋白质诱导试验评核ADP中所Treg的频谱、表同型和动态。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和重返)顺利完成无指导聚类归纳，评核Treg表同型。

结果：与健康ADP相对，来自较慢实质性体的无意识CD4+T蛋白质的指导聚类标示出，激来生的无意识CD4+ Treg频谱减小，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读减小有关。一名HbA1c增高的患儿与实质性加速者和匹配的对照分组相对，Treg著者不尽相同。动态归纳确实，与健康ADP相对，来自加速实质性体的Treg介导的CD4+不稳定性T蛋白质诱导相对受损。表现为对不稳定性CD4+T蛋白质CD25和CD134解读的诱导减小。

三幅1 深入的表同型归纳标示出，CD4+Treg亚同型在较慢实质性函数调用中所减小。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有ADP的来生CD4+CD45RA -蛋白质上。根据上标物解读鉴定出10个元簇:无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)采用9个不同Treg上标降解的10个元簇的MST。每个终端代表人一个空降兵(100个空降兵)，相当大的元空降兵(10个元空降兵)在终端分组四周上色。每个终端中所的煎饼三幅回应单个上标的解读层级。(b)每个元聚类的热三幅，以标示出总体上标解读。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)降解三幅，以及FlowSOM上标的每个元簇的基岩。(e-l)相较轻元素为每个metacluster箱内支线三幅(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP分组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白质(l)。橘色左上方代表人慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配小写字母秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 采用CITRUS的预测模同型证实，Treg频谱的减小是实质性加速的徽章。分级离子通道(a - f)和葡萄归纳(g-k)非常SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的代表人性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利完成受控，各种类型FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(杂色)分组以及ADPSP 606(橘色)中所CD25+ cd127的频谱综合三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的箱内支线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读气压上色，左上方突出的簇被上标为SP和HD函数调用彼此间的不同。(j)箱内支线三幅标示出了在SP(杂色)和HD(灰点)分组中所，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相较轻元素(比重)。(k)直方三幅标示出每个簇的表同型(粉红色)和Treg上标相较解读与文化背景解读(浅蓝色);上列，文件系统Treg_3;前面一行，文件系统Treg_4。文化背景与所有其他簇中所上标的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配小写字母秩检验

三幅3 与健康献血者相对，实质性加速者无意识treg的GITR减小。每个无意识CD4+T蛋白质元簇(无意识T蛋白质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白质;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白质;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的解读热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR解读串联，标示出直方三幅(c)和综合三幅(d)。Wilcoxon匹配小写字母秩和检验，p< 0.07(橘色)所有ADP有数，p< 0.05(浅蓝色)ADPSP 606和匹配的HD不有数在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR解读，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橘色)串联，标示出直方三幅(e)和综合三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配小写字母秩检验

三幅4 来自加速实质性的CD4+ treg蛋白质控制不稳定性CD4+T蛋白质的能够降低。SP分组用浅蓝色的支线和左上方回应，HD分组用银色的支线和左上方回应，橘色的支线/左上方回应ADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(应答者)被上标为CFSE, Treg按观察的比重试样。用抗CD3 /28微珠来生化蛋白质，养成3同一天顺利完成流式蛋白质绝技测定。(a-d)与CD4+应答者相较应的treg养成(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者养成。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE诱导比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导比率。采用阴性对照(激来生的响应蛋白质不含treg)测算诱导比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

三幅5 不稳定性CD4+T蛋白质对加速实质性的T蛋白质来生化的诱导非常敏感。SP分组用浅蓝色的支线和左上方回应，HD分组用银色的支线和左上方回应，橘色的支线/左上方回应ADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质顺利完成分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel上标，treg按观察的比重试样。用抗CD3 /28微珠来生化蛋白质，养成3同一天顺利完成流式蛋白质绝技(CD25反染)和蛋白质因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同养成。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE诱导调升(b)。(c,d) CD25诱导调升(c)和CD134诱导调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中所的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

推论：我们得出的推论是，来自加速实质性子的来生化无意识CD4+Treg在GITR解读中所得到了扩展和丰富，特别强调了促使数据归纳Treg在1同型肾病风险形态中所的异质性的不足之处。

原文来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28